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分光光度法在優化發芽黑小麥富集γ-氨基丁酸培養組分應用

更新時間:2023-09-12      點擊次數:292

黑小麥含有大量人體所需的營養物質和微量元素,是重要的黑色谷物資源。黑小麥中γ-氨基丁酸(GABA)具有促進記憶力、降壓、改善腦活力、緩解焦慮和頭痛等功能。以氯化鈣、氯化鈉分別做培養液,使黑小麥處于鹽脅迫環境中,可能會使黑小麥中GABA含量提高,以實現GABA富集。同時有研究表明,酸性電解水可促進谷物發芽過程中某些生物活性物質的積累。用微酸性電解水處理黑小麥,可能會在殺菌消毒、GABA含量富集方面發揮積極作用。

本文實驗以運黑161為材料,采用微酸性電解水浸泡處理,將磷酸吡哆醛、氯化鈣、氯化鈉等培養組分列為考察因素,做一系列單因素試驗,確定考察因素對黑小麥GABA的影響,以便為黑小麥功能性產品開發提供理論支持。

1、材料

運黑161、GABA標準品

2、儀器與設備

高速離心機、恒溫培養箱、真空冷凍干燥機、上海元析UV-9000S紫外可見分光光度計

實驗部分

1、黑小麥芽的制備

挑選籽粒飽滿、無蛀蟲、無霉爛的“運黑161",分別稱取25.0±0.01g該黑小麥種子于100ml燒杯中。用自制微酸性電解水(pH5.55、有效氯濃度22.4mg/L)對種子浸泡消毒1h。用相應培養液以料液比1:2對種子浸泡8h,將浸泡后的種子均勻平鋪在底部有孔的發芽盒中,于恒溫箱(20℃)進行避光培養。培養期間每天用相應培養液淋澆3次,對照組用等量去離子水淋澆,培養5天后進行采收。

2、培養液成分對黑小麥芽GABA含量的影響

2.1培養液制備

配置質量濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mg/mL鈉溶液,濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mmol/L氯化鈣溶液,濃度分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mmol/L磷酸吡哆醛溶液,濃度分別為5、50、100、150、200、250mmol/L氯化鈉溶液。采收后的黑小麥芽速凍后于真空冷凍干燥機中進行凍干,磨成粉狀后于4℃冰箱貯存備用。

2.2標準曲線建立

配置不同濃度的GABA標準溶液,各取1ml,分別加入0.60ml 0.20mol/L硼酸鹽緩沖液,搖勻后加入2mL5%溶液,搖勻,加入1mL7%次氯酸鈉溶液混勻,用沸水加熱5min,直到溶液變為藍綠色,將其放入碎冰中冷卻至室溫。用紫外分光光度計在645nm處測定吸光度并繪制標準曲線。

2.3樣品GABA含量的測定

準確稱取0.50g黑小麥芽粉樣品,加5mL蒸餾水,在往復振蕩器震蕩提取4h,上層清液于10000r/min離心3min。用移液槍取1mL上層清液于10mL容量瓶中,按測定標準品的方法在光度計波長645nm處測定樣品中GABA含量。

實驗結果

1、濃度對發芽黑小麥GABA含量的影響

2、氯化鈣濃度對發芽黑小麥GABA含量的影響

3、磷酸吡哆醛濃度對發芽黑小麥GABA含量的影響

4、氯化鈉濃度對發芽黑小麥GABA含量的影響



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